Uso alto personalizado da pesquisa do jogo de Adiponectin ELISA do ser humano da sensibilidade

Poços altos do jogo 96 de Adiponectin ELISA do ser humano da especificidade e da sensibilidade
 
Cat.No EHu1550
Tamanho: 96 poços
Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.
* este produto é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.
 
Uso pretendido
Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata de ser humano Adiponectin (igualmente conhecido como o ADP) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.
 
Precisão
A precisão do Intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio) três amostras de concentração conhecida foi testada em uma placa para avaliar a precisão do intra-ensaio.
A precisão do Inter-ensaio (precisão entre ensaios) três amostras de concentração conhecida foi testada em ensaios separados para avaliar a precisão do inter-ensaio.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-ensaio: CV<8>
Inter-ensaio: CV<10>
 
Coleção de espécime
O soro permite que o soro coagule por 10-20 minutos na temperatura ambiente. Centrifugador em 2000-3000 RPM por 20 minutos.
O plasma recolhe o plasma usando o EDTA ou a heparina como um anticoagulante. Centrifugue amostras por 15 minutos em 2000-3000 RPM em 2 - 8°C dentro de 30 minutos da coleção.
A urina recolhe pelo tubo estéril. Centrifugador em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Ao recolher o líquido fluido e cerebrospinal pleuroperitoneal, siga por favor os procedimentos acima mencionados.
O Supernatant da cultura celular recolhe pelos tubos estéreis ao examinar segregue componentes. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recolha os supernatants com cuidado. Ao examinar os componentes dentro da pilha, use PBS (pH 7.2-7.4) para diluir a suspensão da pilha à concentração da pilha de aproximadamente 1 million/ml. Danifique pilhas através dos ciclos repetidos da gelo-aproximação amigável para deixar para fora os componentes internos. Centrifugue em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tecidos da lavagem do tecido em PBS (pH 7,4) para remover completamente o sangue adicional e a pesá-lo antes da homogeneização. Triture tecidos e homogeneize-os em PBS (pH7.4) com um homogenizador de vidro no gelo. Aproximação amigável em 2-8°C ou gelo no centrifugador de -20°C. em 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
 
Nota

• As concentrações da amostra devem ser previstas antes de ser usada no ensaio. Se a concentração da amostra não está dentro da escala da curva padrão, os usuários devem contactar-nos para determinar a amostra ótima para suas experiências particulares.

• As amostras a ser usadas no prazo de 5 dias devem ser armazenadas nas amostras 2-8°C. devem ser aliquoted ou devem ser armazenadas em -20°C dentro de 1 mês ou em -80°C dentro de 6 meses. Avoid repetiu ciclos da aproximação amigável do gelo.

• As amostras devem ser trazidas à temperatura ambiente antes de começar o ensaio.

• Centrifugador para recolher antes de usar a amostra.

• As amostras que contêm NaN3 não podem ser testadas enquanto inibe a atividade da peroxidase (HRP) do rabanete de cavalo.

• Recolha os supernatants com cuidado. Quando os sedimentos ocorreram durante o armazenamento, a centrifugação deve ser executada outra vez.

o *Sample não pode ser diluído com este jogo. Devido o ao material nós usamo-nos para preparar o jogo, a interferência de matriz da amostra pode falsamente comprimir a especificidade e a precisão do ensaio.
 
Preparação do reagente
O padrão reconstitui o 120μl do padrão (64mg/L) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 32mg/L conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo a solução conservada em estoque padrão (32mg/L) 1:2 com o diluente padrão para produzir as soluções 16mg/l, 8mg/L, 4mg/L e 2mg/L. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 mg/L). Toda a solução restante deve ser congelada em -20°C e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:
 

 
Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 25x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.
 
Sumário

1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.

2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.

3. Lave a placa 5 vezes.

4. Adicione a solução A e B. Incubação da carcaça por 10 minutos em 37°C.

5. Adicione param a solução e a cor torna-se.

6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.
 
Referências
Waki H., Yamauchi T., Kamon J., Ito Y., Uchida S., Kita S., Hara K., Hada Y., Vasseur F., Froguel P., Kimura S., Nagai R., Kadowaki T.
J. Biol. Chem. 278:40352- 40363(2003)