A insulina personalizada do rato gosta de jogo obrigatório do sanduíche ELISA de Wells IGFBP3 do jogo 96 da proteína 3 ELISA do fator de Groeth

A insulina personalizada do rato gosta de jogo obrigatório de Elisa do sanduíche de Wells IGFBP3 do jogo 96 da proteína 3 ELISA do fator de Groeth

Cat.No E1613Ra

Escala padrão da curva: 2ng/ml - 600ng/ml

Sensibilidade: 0.93ng/ml

Tamanho: 96 poços

Armazenamento: Armazene os reagentes em 2-8°C. para um armazenamento de mais de 6 meses referem a data de validade mantêm-no em ciclos repetidos Avoid da aproximação amigável de -20°C. Se os reagentes individuais são abertos recomenda-se que o jogo esteja usado dentro de 1 mês.

o produto dos *This é para o uso da pesquisa somente, não para o uso em procedimentos do diagnóstico. É recomenda altamente ler inteiramente antes de usar esta instrução.

Uso pretendido

Este jogo do sanduíche é para a detecção quantitativa exata de insulina do rato como a proteína obrigatória 3 do fator de Groeth (igualmente conhecida como IGFBP3) no soro, plasma, supernates da cultura celular, lysates da pilha, homogenates do tecido.

Princípio do ensaio

Este jogo é um ensaio Enzima-ligado da imunoabsorção (ELISA). A placa foi pré-revestida com o anticorpo do rato IGFBP3. IGFBP3 apresentam na amostra são adicionados e ligam aos anticorpos revestidos nos poços. E o anticorpo então biotinylated do rato IGFBP3 é adicionado e liga a IGFBP3 na amostra. Então Streptavidin-HRP é adicionado e liga ao anticorpo de Biotinylated IGFBP3. Após a incubação Streptavidin-HRP desatado é lavado afastado durante uma etapa de lavagem. A solução da carcaça é adicionada então e a cor torna-se em proporção à quantidade do rato IGFBP3. A reação é terminada pela adição de ácido para a solução e a absorvência é medida em 450 nanômetro.

Reagente fornecido

Precauções

• Antes do uso, o jogo e a amostra devem ser aquecidos naturalmente à temperatura ambiente 30 minutos.
• Esta instrução deve restritamente ser seguida na experiência.
• Uma vez que o número desejado de tiras foi removido, reseal imediatamente o saco para proteger permanecer da deterioração. Cubra todos os reagentes quando não no uso.
• Make sure que introduz com pipeta a ordem e a taxa de adição de bem-a-bem ao introduzir com pipeta reagentes.
• A pipeta derruba e o aferidor da placa à disposição deve ser limpo e descartável para evitar a contaminação colateral.
• Evite usar os reagentes dos grupos diferentes junto.
• A solução B da carcaça é sensível à luz, não expõe a solução B da carcaça para iluminar-se por muito tempo.
• Pare a solução contém o ácido. Vista por favor a proteção do olho, da mão e de pele ao usar este material. Evite o contato da pele ou das mucosas com reagente do jogo.
• O jogo não deve ser usado além da data de validade.

Preparação do reagente

Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente antes de usar.

O padrão reconstitui o 120μl do padrão (800ng/ml) com o 120μl do diluente padrão para gerar uma solução 400ng/ml conservada em estoque padrão. Permita que o padrão sente-se por 15 minutos com agitação delicada antes de fazer diluições. Prepare pontos padrão duplicados em série diluindo o 1:2 padrão da solução conservada em estoque (400ng/ml) com o diluente padrão para produzir as soluções 200ng/ml, 100ng/ml, 50ng/ml e 25ng/ml. O diluente padrão serve como o padrão zero (0 ng/ml). Toda a solução restante deve ser congelada em -20℃ e ser usada dentro de um mês. A diluição das soluções padrão sugeridas é como segue:

Amortecedor 20ml diluído da lavagem do concentrado 30x do amortecedor da lavagem no deionized ou água destilada para render 500 ml do amortecedor da lavagem 1x. Se os cristais formaram no concentrado, mistura delicadamente até que os cristais se dissolverem completamente.

Procedimento de ensaio

1. Prepare todos os reagentes, soluções padrão e amostras como instruídas. Traga todos os reagentes à temperatura ambiente antes de usar. O ensaio é executado na temperatura ambiente.

2. Determine o número de tiras exigidas para o ensaio. Introduza as tiras nos quadros para o uso. As tiras não utilizadas devem ser armazenadas em 2-8°C.

3. Adicione o padrão 50μl ao padrão bem. Nota: Não adicione o anticorpo ao padrão bem porque a solução padrão contém o anticorpo biotinylated.

4. Adicione a amostra 40μl aos poços da amostra e então adicione o anticorpo de 10μl anti-IGFBP3 aos poços da amostra, a seguir adicione o streptavidin-HRP 50μl aos poços da amostra e aos poços padrão (poço do controle não vazio). Misture bem. Cubra a placa com um aferidor. Incube 60 minutos em 37°C.

5. Remova o aferidor e lave a placa 5 vezes com amortecedor da lavagem. Embeba poços com pelo menos o amortecedor da lavagem de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para a lavagem automatizada, aspire todos os poços e lave 5 vezes com o amortecedor da lavagem, enchendo em demasia jorra com amortecedor da lavagem. Borre a placa nas toalhas de papel ou no outro material absorvente.

6. Adicione a solução A da carcaça 50μl a cada um poço e adicione então a solução B da carcaça 50μl a cada um bem. Incube a placa coberta com um aferidor novo por 10 minutos em 37°C na obscuridade.

7. Adicione 50μl param a solução a cada um bem, a cor azul mudará no amarelo imediatamente.

8. Determine a densidade ótica (valor do OD) de cada um poço que usa imediatamente um grupo do leitor do microplate a 450 nanômetro dentro de 10 minuetos após ter adicionado a solução da parada.

Sumário

1. Prepare todos os reagentes, amostras e padrões.

2. Adicione a amostra e o reagente de ELISA em cada um bem. Incube para 1 hora em 37°C.

3. Lave a placa 5 vezes.

4. Adicione a solução A e B. Incubação da carcaça por 10 minutos em 37°C.

5. Adicione param a solução e a cor torna-se.

6. Leia o valor do OD dentro de 10 minutos.

Cálculo de resultado

Construa uma curva padrão traçando o OD médio para cada padrão no vertical (Y) linha central contra a concentração no horizontal (X) a linha central e tira uma melhor curva do ajuste através dos pontos no gráfico. Estes cálculos podem melhor ser executados com o software por computador do curva-encaixe e a melhor linha do ajuste pode ser determinada pela análise de regressão.

Referances

“NENHUNS jogos um papel em diminuições LPS-induzidas em circular IGF-I e IGFBP-3 e sua expressão genética no fígado.”
Priego T., Ibanez de Caceres I., Martin A.I., Villanua M.A., López-Calderon A.
Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 286: E50- 6(2004)